用SGM Plus?進(jìn)行擴(kuò)增

材料與儀器

SGM Plus? PCR 混合物的各種成分
純無菌水
熱循環(huán)儀

步驟

1. 參照 ABI 的操作步驟，為待擴(kuò)增樣品準(zhǔn)備足量的混合物，每個(gè)樣品管包含：

(a) AMPF/STR?PCR 反應(yīng)混合物 21 μl

(b) AMPF/STR?SGM Plus?引物一套 11 μl

(c) Amplitaq gold?DNA 聚合酶 1μl

2. 從每個(gè)樣品管吸出 30 μl 混合物，或加到單個(gè)大 PCR 管中，或加到薄壁微滴定板中，用黏性薄片封板。

3. 從冰箱取出樣品，待融化。

4. 混勻樣品，甩下管中內(nèi)容物。

5. 加約 1 ng DNA 到已有適量 SGM Plus? PCR 混合物樣品管中，加適當(dāng)體積的無菌純水（如 Sigma 組織培養(yǎng)用水）至終體積 20 μl。

6. 同時(shí)擴(kuò)增一個(gè)已知基因，作為對照（如作為試劑盒的對照）。

7. 將樣品管置熱循環(huán)儀（如 ABI9700）上，已設(shè)定了適當(dāng)?shù)难h(huán)細(xì)節(jié)的程序，如下，開始運(yùn)行：

(a)95°C 保持 11 min ± 5s。

(b)94 ± 1°C 保持 1 min ± 2s。

(c)59 ± 1°C 保持 1 min ± 2s。

(d)72 ± 1°C 保持 1 min ± 2s。

8. 重復(fù)步驟 7b 到 7d28 次。

9. 60 ± 1°C 保持 45 min ± 5s。

10. 4°C 保溫至需要時(shí)。