細胞系結果分析

材料與儀器

GeneScan?和Genotyper?軟件 PowerMac計算機

步驟

本節包括 2 個主要領域：分析利用GeneScan?分析軟件中 DNA 程序收集軟件收集到的原始數據，和利用Genotype?軟件為前面用GeneScan?軟件分析過的 DNA 譜中的指定等位基因名稱。

1. 打開凝膠圖像，調節對比度，確保所有的顏色都能看清。

2. 設定分析范圍在 75 bp 和 450 bp 內定尺寸標準峰值中。

3. 再作一張凝膠圖像。

4. 用凝膠自動分道器進行分道。

5. 分道結束時，檢查各道正確；每個泳道上的數據可提取出來，形成單個樣品的文件。從菜單中選擇要提取的泳道。

6. GeneScan?分析軟件用兩個控制窗口一一分析控制窗和結果控制窗。第一次打開一個項目時分析控制窗出現，用于設定內設尺寸標準和改變分析參數。當樣品圖像分析完畢時，可選擇結果控制窗。該窗控制顯示那些結果及其格式。

7. 使用分析控制窗，為每個分析樣品生成尺寸標準，峰值如下設定：75、100、140、 150、 160、 200、 250、 300、 400、 450。

8. 安裝恰當的母板。

9. 點擊帶顏色的 B、G、Y 和 R 柱標題，選中所有待分析的泳道。點擊分析開始樣品分析。已分析的所有樣品會在每個網格顯示一個小三角。

10. 已分析的樣品此時可在結果控制窗中打開，可檢査對照的解析梯度峰值和可接受程度。

11. 從此窗口可打印每個樣品的 GeneScan?電子圖（EPG）。


12. 這時 Genotyper?軟件可用來為 GeneScan?中看到的每個峰指定名稱。

13. 從一塊凝膠獲得的所有數據可作為一個 Genotyper?文件同時處理。

14. 從 GeneScan?文件中將所有的數據導入 SGM Plus?的 Genotyper?模板。

15. 通過按（Apple + 1 ) 標記各峰。

16. 確認每個樣品都能正確識別的尺寸標準是很重要的，通過選定紅染樣品鍵點擊繪圖窗口鍵對指定的名稱進行再檢查。

17. 等位梯度也應再檢査，確保所有代表性等位基因已正確識別。

18. 如果以上都能做到，每個樣品的標簽可再檢查。

19. 還應進行一項檢査：所有的峰已正確指定，任何有可能不正確的峰都應通過點擊與此標簽對應的峰來去掉。

20. 一旦分析員對所指定的名稱有信心，可為每個樣品打印 Genotyper?，加到 GeneScan?EPG 打印件中。

21. 此時可對每個細胞系樣品的分析得到的譜與已公開的譜進行比較。