凍存細胞的復蘇

原理

凍存細胞應在流水中快速融化并加入生長培養液。實驗者應配戴護目鏡和手套，因為曾浸沒在液氮中的凍存管中可能漏人液氮，而當融化凍存液時凍存管中的氣體溫度上升可導致爆炸。

材料與儀器

凍存細胞
乙醇 細胞培養液
凍存管、水浴鍋

步驟

1) 調整水龍頭溫度為 40°C，在龍頭下放置一廣口燒杯。

2) 從液氮中取出凍存細胞的凍存管。

3) 將凍存管置于 40°C 流水中直至完全融化，一旦冰塊消失即將凍存管從水浴中取出。

該步驟的目的是盡可能快地融化細胞，但不允許細胞溫度升到 37°C 以上而且一旦其融化細胞便不應再保存在凍存液中。

4) 用 70% 乙醇擦洗凍存管外部以降低污染機會。

5) 吸取凍存管內容物于 T-25 細胞培養瓶或培養皿中，緩慢加人 4 ml 生長培養液，并混勻。

6)37°C 孵育細胞，在 24 小時內更換培養液以滋養細胞。

注意事項

• 某些類型細胞呈現較好的復蘇效果，如果緩慢加入培養液于凍存液中以使凍存液被去除，然后細胞離心后重懸于新鮮培養液中。

• 凍存記錄：保存凍存細胞的精確記錄是很重要的。需建立細胞生長史、名稱、傳代次數、凍存日期、復蘇次數、生長培養液和在凍存器中的位置都是應記錄的項目。

• 凍存液：應用補充 10%~20%FBS 的生長培養液和 10% 甘油或 DMSO。大多數懸浮細胞釆用 DMSO。最佳凍存液配方在比較 FBS 濃度（10%~20%)，DMSO(5%~20%) 或甘油（10%~15%) 濃度后決定。在低溫狀態保存數天后進行復蘇效率的比較。

小心：甘油；DMSO

常見問題

將細胞放在低溫環境，減少細胞代謝，以便長期儲存。

來源《細胞實驗指南（上冊)》作者：黃培堂。