血細(xì)胞計數(shù)器計數(shù)法

原理

血細(xì)胞計數(shù)器含有 2 個室，每個室充滿并蓋上蓋玻片后總體積為 9x10-3 ml, 每室有 9 個大方格，因此蓋上蓋玻片后每個大方格的容積為 0.1 mm3 或 1.0x10-4 ml，對計數(shù)來講，9 個大方格再進行分隔沒有必要，可以忽略不計。

材料與儀器

細(xì)胞樣本
胰蛋白酶 細(xì)胞培養(yǎng)液
毛細(xì)吸管 載玻片 蓋玻片

步驟

1、按前述方案（見「胰蛋白酶處理分離細(xì)胞」）用胰蛋白酶處理細(xì)胞，細(xì)胞重懸于細(xì)胞培養(yǎng)液中。

2、用毛細(xì)吸管吸出欲計數(shù)的兩份細(xì)胞標(biāo)本。依靠毛吸管作用細(xì)胞懸液進人覆蓋蓋玻片的計數(shù)器。

3、對細(xì)胞計數(shù)器兩邊的 9 個大方格中各 5 個格即共 10 個格進行計數(shù)。

4、合汁 10 個大方格的細(xì)胞數(shù)（每室 5 個，共 2 室），算出 1x10-3 ml 中的細(xì)胞數(shù)（每個大方格 1x10-4 mlx10 個大方格=10-3 ml 容積)。細(xì)胞總數(shù)乘以 1000 即得每毫升計數(shù)細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)。

5、計數(shù)完畢后立即用雙蒸水清洗計數(shù)器和蓋玻片，然后用 70% 乙醇清洗，用擦鏡紙擦干。

注意事項

應(yīng)用計數(shù)器計數(shù)出現(xiàn)的某些錯誤的原因：

• 取自原始細(xì)胞懸液的不均勻取樣。原始細(xì)胞懸液應(yīng)攪動混勻，在細(xì)胞計數(shù)過程中細(xì)胞不應(yīng)沉淀至容器的底部。

• 計數(shù)器室內(nèi)充填不夠或過度填充。計數(shù)室的容積是基于蓋玻片平穩(wěn)地置于計數(shù)器邊緣上，過度充填增加被計數(shù)的體積。

• 細(xì)胞團、細(xì)胞團不易通過毛吸作用進人計數(shù)室，故被排斥在計數(shù)之外進人計數(shù)室的小細(xì)胞團較難精確計數(shù)，甲個分散狀細(xì)胞懸液對精確計數(shù)來講是至關(guān)重要的，細(xì)胞應(yīng)徹底混合達到均勻化。

常見問題

來源于細(xì)胞實驗指南（上冊)，作者：黃培堂。