單層細胞在細胞瓶中的接種

原理

單層生長的細胞增殖，融合成片，并長滿細胞瓶表面。有些細胞靠頻繁地換液可維持細胞在平臺期數(shù)天至數(shù)周；而許多其他細胞系需要胰蛋白酶處理、傳代培養(yǎng)后才能存活下來，用胰蛋酶處理可將細胞從生長物表面分離下來以促進傳代培養(yǎng)。后種細胞系不易呈現(xiàn)出接觸抑制并繼續(xù)增殖，達到極限后細胞則從細胞瓶表面脫落, 很難再彌散接種。

材料與儀器

步驟

1) 下列步驟描述胰蛋白酶處理細胞的過程（見下文“胰蛋白酶處理分離細胞”）

2) 重懸細胞于培養(yǎng)液中。

在此時進行細胞計數(shù)嚴(yán)好。若記錄傳代次數(shù)以識別細胞的生長經(jīng)歷，可按方便傳代計劃的比例稀釋細胞

3) 分裝細胞懸液于含有合適 PH 的培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。

傳代細胞在貼壁和再次進行代謝前的大約幾小時中不能自行調(diào)節(jié) PH。傳代期是特別重要的時期.

培養(yǎng)液的 pH 和細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿氣相中的 CO2 含量應(yīng)在接種細胞前平衡好。在細胞加人前將培養(yǎng)液加入培養(yǎng)瓶中，并將蓋子松松地蓋上，置培養(yǎng)箱中放罝 10~15 分鐘即可。

4) 在接受細胞的細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中混勻細胞，將細胞懸液均勻鋪在容器表面、細胞貼壁通常笫 8~10 小時，人二倍體成纖維細胞經(jīng)常按以 1:4 比例，一周傳代一次。細胞倍增時間的估算可采用以下方法：即滿版細胞 1:2 比例傳代后再次鋪滿培養(yǎng)瓶的時間，或以 1:4 比例傳代兩次細胞倍增時間后細胞再次鋪滿。