懸浮細胞在細胞培養瓶中的接種
原理
淋巴樣細胞通常呈懸浮狀生長。常用的培養液為含 10%~15%FBS 的 RPMI1640 各種細胞系間最佳接種密度和平臺期細胞密度各不相同。當培養一種新的細胞系時其最佳原則為按 1:2 和 1:4 的比例傳代細胞，在 3~4 天時間內進行細胞計數以計算每毫升細胞數。細胞在傳代后 24~36 小時細胞數會翻倍。傳代細胞密度太低，細胞容易死亡，反映出細胞在達到增長前有較長滯留期。一旦細胞適應實驗室的培養條件冉決定備細胞株的最佳接種密度。細胞每毫升接種數量可從 5x10 4 ~8x105 不等培養液 PH 下降呈現黃色，表明細胞已達到最大密度需要進行換液或傳代培養。
懸浮生長細胞傳代一般只需簡單稀釋操作即可，若需完全更換培養液只需低速離心沉淀，再懸于合適的培養液中即可。
材料與儀器
淋巴樣細胞
含 10%~15%FBS 的 RPMI1640培養液
細胞培養瓶
步驟
1、 如果細胞未在轉瓶中培養，只需搖晃、刮取或胰蛋白酶處埋（見下文“胰蛋白酶處理分離細胞”）即可將細胞從細胞瓶表面分離下來。
2、輕輕地吹打細胞（移液管上下吹打），將細胞團吹散。
3、取1ml 細胞懸液進行細胞計數，勿讓細胞沉積在瓶底。輕輕來回轉動細胞瓶使細胞處于懸浮狀態。
4、稀釋細胞，使其終濃度約為每毫升 2x105~4x105。
5、進行細胞計數，并用臺盼藍排斥試驗進行細胞活力檢測，操作方案見下文“細胞計數”。
注意事項
注意無菌操作，操作前用酒精擦拭雙手。
常見問題
懸浮細胞培養的優點：繁殖速度快、可以培養出齡期均一的細胞集團。
來源《細胞實驗指南（上冊)》作者：黃培堂。
