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用流式細胞術計數網織血小板
發布日期:2024-09-18 15:24:07


用流式細胞術計數網織血小板


原理

血小板 RNA 含量與血小板生成狀態相關,他可以區分是因為骨髓抑制或外周血破壞增加引起的的血小板減少。在放療后或移植后,網織血小板可以監測巨核細胞和血小板生成狀態。


材料與儀器

EDTA 甲醛 Tyrode 緩沖液 噻唑橙染液
流式細胞儀


步驟

1. 制備富含血小板血漿:將 EDTA 抗凝全血 500 r/min 離心 8 min,取出上層含血小板血漿,2000 r/min 離心10 min,棄上清液,底層血小板用檸檬酸鈉葡萄糖 EDTA 緩沖液(pH 7.4)再懸浮,并洗 1 次,再用 Tyrode 緩沖液(含牛血清白蛋白和 EDTA)洗 2 次,再懸浮在 Tyrode 緩沖液中,調整血小板濃度為 100 x 109 /L 作為樣品。

2. 醛化固定:向標本加入 1% 甲醛,在 4℃ 放置 2 h 以上,以固定血小板。檢測前用 Tyrode 緩沖液洗一次。

3. 染色計數:向 50 ul 經過醛化固定的血小板懸液加 450 ul 噻唑橙染液,放置室溫暗處 1~2 h,用流式細胞儀測定 525 nm 波長處的熒光強度,代表 RP 數量。同時計數血小板總數,計算得知 RP 的比值。這即 RP 的半自動計數法。因為該法采用噻唑橙染色,
被染色的血小板又稱為噻唑橙陽性血小板(TO+ 血小板)。

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