正常人支氣管上皮細胞培養

實驗材料：

1. 手術切除的含支氣管的正常肺組織

2. 胰蛋白酶/EDTA液：0.05%胰蛋白酶，0.5mmol/L EDTA

3. 6孔培養板：用多聚賴氨酸包被

4. 不含Ca2+ 和Mg2+的1×PBS（pH=7.2），添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素，pH7.4

5. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷

6. 離心管（15ml、50ml）

實驗方法：

1. 將分離的兩片肺葉組織用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復清洗幾次；

2. 小心的用眼科剪將肺葉中的白色支氣管組織剪下；

3. 再用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復沖洗若干次；

4. 將取下的支氣管組織剪成1mm3 左右大小的組織塊；

5. 用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復清洗，直至清洗液清亮為止；

6. 將組織塊轉入15ml離心管中，200rpm/min離心2min ，離心后傾去1×PBS（pH=7.2）；

7. 加入組織塊4-5倍體積的胰酶，37℃水浴中消化30min，不時震蕩；

8. 消化完成后，200rpm/min離心2min，小心傾去消化液，再加入組織塊4-5倍體積膠原酶Ⅱ，37℃水浴中消化1h，不時震蕩；

9. 消化完成后震蕩離心管3次，之后靜置5min，待較大的組織塊沉降至管底后，小心吸出上層懸液（如吸出的懸液中絮狀或塊狀的組織較多，可考慮過200目網篩去除），轉入另一離心管中；

10. 1000rpm/min離心5min，傾去上層液體，加入培養基重懸細胞，轉入6孔板中，置于37℃、5%CO2 的培養箱中培養。

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