腫瘤組織源性的原代細胞培養(yǎng)

概述

腫瘤細胞的原代培養(yǎng)與正常細胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似。一般常用原代細胞的基礎培養(yǎng)基，10%血清濃度即可，在原代培養(yǎng)時需加入原代細胞培養(yǎng)的特制添加物，或原患者血清（1%-2%）以利細胞生長。用細胞生長因子如胰島素、氫化可的松、雌激素等等。

也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子。腫瘤組織分離為腫瘤細胞原代培養(yǎng)的方法主要有組織塊法、酶消化法、鉭網(wǎng)法、脫落細胞法等。

1.組織塊法

將取得的瘤組織去除脂肪、結締組織及壞死部分，在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎組織，切成1-2mm3 小塊，接種于培養(yǎng)瓶（或皿）中，37℃、5%CO2 或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養(yǎng)。

2.酶消化法

在剪碎組織，切成1-2mm3 小塊中，加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml膠原酶，在37℃水浴中消化30min或更長一些，去除消化液，用洗液洗3次，培養(yǎng)基洗1次后，用完全培養(yǎng)基懸浮，并用吸管吹打分散制成細胞懸液，計數(shù)。以（5-10）x108 個/L細胞濃度，在含有10%小牛血清的RPMI、EagleMEM或DMEM中，在37℃、5%CO2 下分瓶（或皿）中培養(yǎng)。

3.鉭網(wǎng)法

在一張面積約為1cm2 的鉭網(wǎng)上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊（1-2mm3 大小），用鑷子輕壓，使其粘于網(wǎng)上，再把鉭網(wǎng)放入培養(yǎng)皿中，使網(wǎng)下的組織塊與皿壁緊緊接觸，于37℃、5%CO2 下培養(yǎng)，每隔2-3天換液一次，5天后可見有上皮細胞從網(wǎng)上移出，并能在相當于腫瘤組織部位形成純凈的單層上皮細胞。

4.脫落細胞法

將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結締組織，洗液洗2次后，用刀片將腫瘤組織切成細薄片，在切割的同時有許多上皮細胞脫落下來，脫落細胞經(jīng)洗滌后，加入完全培養(yǎng)基，便可獲得較純的上層細胞，于培養(yǎng)瓶（或皿）中，37℃、5%CO2 下培養(yǎng)，每隔2-3天換液一次，7-10天上皮細胞逐漸長成單層。

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