脂肪源干細胞的培養

（1）吸脂術時用無菌針管從臀上方吸取深層脂肪組織20 mL。

（2） 在1 h內將其移至離心管內，加入等量PBS緩沖液，充分振蕩后低速離心800 r/min×10 min。

（3）反復沖洗3次后加入等量15 g/L I型膠原酶，37℃水浴中充分振蕩30 min，再加入等量胎牛血清（FBS）中止。

（4）低速離心10 min后棄去上清. 將下層細胞用PBS懸浮后加入16 mmol/L NH4Cl 37℃水浴中10 min以裂解紅細胞. 低速離心10 min后再用PBS沖洗3次. 最后將細胞用含100 mL/L FBS+10 g/L青霉素的DMEM懸浮后移入培養瓶中，37℃，50 mL/L CO2培養箱中孵育。

（5）48 h后首次換液，棄去懸浮細胞. 隨后每3天換液，1周后傳代. 將第3代細胞用于流式細胞儀檢測. 濃集細胞到109/L后進行流式細胞儀檢測。

（6）細胞傳至第3代時將其以2×107/L的細胞數分別轉入各定向培養基中進行培養. 誘導培養2周后，對成脂誘導組進行油紅Ｏ脂肪顆粒染色。

現在脂肪干細胞缺乏特異的表面標志鑒定，各類文獻提到脂肪干細胞表達陽性的標志物有：cd13，cd29，cd59，cd49e，cd73，cd90，HLA-ABC等。但表達陽性不代表具有特異性，所以要從標志物上鑒定脂肪干細胞還是很困難的，應該說不具有很強的說服能力。

按文獻所說的步驟來提取脂肪干細胞，形態類似干細胞，并且具有多向分化的能力，這就足以說明提取的細胞是干細胞。

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