臍靜脈內皮細胞原代培養(yǎng)

收集足月順產或剖腹產新生兒臍帶，保存于5%糖鹽水中，4℃。臍帶在4℃ 5%糖鹽水中保存時間不超過24h。

在超凈工作臺上將臍帶取出，置滅菌彎盤中，用生理鹽水沖洗臍靜脈至沖出的液體不含紅細胞。鉗閉臍帶一端，從另一端向臍靜脈內注入37℃預熱的0.25%胰蛋白酶，鉗閉另一端。置37℃的生理鹽水中10~15min。

取出臍帶，松開一端鉗子，放出消化液，加入含15%新生小牛血清的M199培養(yǎng)基[含有85ml M199培養(yǎng)基(1000ml M199培養(yǎng)基，0.292g谷氨酰胺，3.0g Hepes ，2.0g NaHCO3)，15ml新生小牛血清，青、鏈霉素貯存液5μl，胰島素1U]以終止反應。

離心800rpm×10min，棄上清。沉淀用含M199培養(yǎng)基稀釋，以1×105的密度接種。

置于5%CO2孵箱中培養(yǎng)。每三天更換一次培養(yǎng)液，每天定時觀察培養(yǎng)液的酸堿度和透明度。在相差顯微鏡下觀察細胞貼壁和生長狀況，直到細胞融合。

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