3T3成纖維細(xì)胞傳代

（1）準(zhǔn)備大量的3T3細(xì)胞，每個安瓿瓶裝1－1000000個細(xì)胞，然后凍存。使用的細(xì)胞不超過20代。

（2）將3T3細(xì)胞加入175cm2的培養(yǎng)瓶中，用含有10％小牛血清DMEM培養(yǎng)。案每平方厘米15000個細(xì)胞接種。2天后換液，每4－5天傳代。

（3）通過60Gy X射線或Co飼養(yǎng)細(xì)胞滅活。被照射的3T3細(xì)胞在4度條件下可存放3－4天。

（4）在無照射源的條件下，用絲裂菌素C滅活飼養(yǎng)細(xì)胞。

（5）在37度條件下，用400微克每毫升的絲裂菌素C處理單層3T3細(xì)胞1h。

（6）用胰蛋白酶消化絲裂菌素C處理過的細(xì)胞活，混懸細(xì)胞，用含有血清的培養(yǎng)液洗細(xì)胞2次。然后，用完全培養(yǎng)液混懸細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞密度。

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