分離小鼠胚胎實驗

原理

胚胎是懷孕最初兩個月內的幼體。囊胚、胚的早期發育和胚胎發育是一個連續過程。在體節時期，三個胚層都發生了變化。外胚層在背部中線凹陷成溝，稱神經溝，溝的兩岸稱神經脊。神經脊逐漸接近、愈合，致使神經演變為縱貫胚體的神經管。神經管和神經脊將來演化為神經系統。內胚層隨著胚體卷曲成管狀，稱原腸，原腸依部位又分為前腸、中腸和后腸。

材料與儀器

DBSS
70%乙醇
培養皿 尖鑷子 尖剪刀 超凈工作臺 本生燈

步驟

1. 交配。將分籠的雄鼠和雌鼠合籠進行交配，雌鼠 3 天后可進入動情期，此時交配的成功率最高。這一過程可以有計劃地進行，使胚胎在適宜的時間產生。為確定成功交配的時間需每天早晨檢查雌鼠的陰栓。

2. 計算胚胎發育時間：將發現陰栓的日子定為零天，胚胎發育時間由這一天開始計算。整個孕期約為 19~21 天，分離完整胚胎進行細胞培養的合適時間為第 13 天，此時胚胎已相當大，但仍含有大量的未分化的間充質細胞，這是培養細胞的主要來源。但分離、處理超過妊娠期一半的胚胎可能需要許可證（例如在英國），所以用 9~10 天的胚胎也許更可取。雖然從這種胚胎分離的組織細胞的數目相對少一些，但能夠生長的細胞的比例較高。除了腦和心臟之外的大部分器官于妊娠第 9 天開始形成，11 天之前很難分離。單一器官的分離在第 13~14 天比較容易，大部分器官于第 18 天完全形成。



3. 拉頸處死小鼠（U .K Schedule I procedure），用 70 % 乙醇仔細消毒其腹部表面。

4 . 于膈膜附近的腹中線位置橫向撕開皮膚，向兩側翻開皮膚，顯露未接觸的腹壁。

5. 用無菌剪刀沿腹中線縱行剖開， 露腹腔臟器，此時可見充滿胚胎的子宮位于后腹腔。

6. 取出子宮置于盛有 10 ml 或 20 ml DBSS （取材用BSS （含有高濃度抗生素的BSS（50 ml 盛于無菌燒杯中，用于冷卻燒過的器械）），裝在 25~50 ml 的螺口試管或通用容器內）的 25 ml 或 50 ml 的螺口瓶內。

7. 將未處理的子宮移入培養室，轉人新的培養皿中，內含無菌的 DBSS 。

8. 分離胚胎：

(a) 用兩個無菌鑷子撕開子宮，注意保持鑷子尖閉合，以免過度破壞子宮及對胚胎施加過大壓力。

(b) 將胚胎與胎膜和胎盤剝離，放在培養皿的另一邊，避開血污。

9. 將胚胎轉入新的培養皿中，若有大量的胚胎要取（如 4 或 5 窩以上），可將培養皿置于冰上。

注意事項

1. 將器械浸入乙醇后點燃，即對器械進行消毒時，要十分小心，同時不要將還很熱的器械放回乙醇內！

2. 以上所有步驟應在組織培養室外進行，于小型超凈臺內快速操作將有助于保持無菌。不要把活體動物帶入培養室因為活體動物可帶入污染。若動物尸體需在培養室內處理，必須先浸入乙醇或用乙醇涂抹，用后盡快處理掉。

常見問題

胚胎的發育過程是一個極為細致復雜的過程，是細胞和組織按照一定的順序進行分化的過程，在這個過程中任何一個環節受到干擾，就會導致各種畸形。特別是器官迅速分化發育時，最易受到致畸因子的干擾。