方案12.2 分離雞胚實驗

原理

無菌操作從蛋中取出雞胚放入培養皿中。

材料與儀器

步驟

材料：
無菌材料
DBSS: 取材用 BSS(含有高濃度抗生素的 BSS，見附錄 I)，裝在 25?50 ml 的螺口試管或通用容器內
BSS：50 ml 盛于無菌燒杯中，用于冷卻燒過的器械
20?50 ml 小燒杯或蛋杯
直頭和彎頭鑷子
9 cm 皮氏培養皿
 
非滅菌材料
孵化 10 天的受精卵
70%乙醇
棉簽

孵箱（非 C02)

操作步驟

1. 在濕潤的環境中于 38.5℃：條件下孵卵，每天轉動 180°，然雞卵孵育也需要 20?21 天，但它們的發育階段不同于鼠胚。分離整個胚胎進行細胞培養，需在大約第 8 天時進行。若分離器官則大約在第 10?13 天（在英國第 10 天是要許可證的最后期限）。

2. 用 70% 乙醉棉簽消毒雞卵，鈍端向上放于小燒杯內（圖 12.4a）。

3. 用無菌鑷打破卵殼（圖 12.4b）, 剝離卵殼直到氣旗的邊緣（圖 12.4c）。

4. 重新消毐鑷子后（浸入乙醇，燒干乙形，于無菌的 BSS 屮冷卻）用鑷子剝離白色的殼膜，露下面的絨毛嵌喪膜（CAM）及血管（圖 12.4d、圖 12.4e）
 

5. 用彎鑷子刺破絨毛尿褒膜（圖 12.4f），輕輕夾住頭部下方，提出胚胎（圖 12.4 g、圖 12.4 h），不要完全閉合鑷子，避免頸部被切斷，將中指墊在鑷子下，用它限制食指的壓力（圖 12.4 g）。

6. 將雞胚放入直徑 9 cm 含 20 ml DBSS 的培養皿中（圖 12.4i），等待進一步解剖和培養（見方案 12.7）。