新鮮實體組織樣本的制備（化學處理法）

原理

化學處理法是將組織細胞間起黏著作用的鈣、鎂離子置換出來，從而使細胞分散開來。

材料與儀器

胰酶 組織
EDTA
尼龍網

步驟

一、試劑的配制

1. 0.2% EDTA 配制：稱 EDTA 0.2 g，加入 Hank 液 100 ml，封裝高壓消毒。置 0~4℃ 保存。

2. 胰酶加 EDTA 配制：胰酶 0.25 g 加 PBS ( pH 7.0) 200 ml，濃度 0.125%，EDTA 0.2 g 加 PBS ( pH 7.0) 100 ml，濃度 0.2%。各取 40 ml 混合，分裝置冰箱保存，用時過濾即可使用。

二、實驗方法

1. 將組織切成薄片，置入試管中。

2. 首先加入 EDTA 液 5 ml，室溫下 0.5 h，離心棄之。

3. 再加入胰酶-EDTA 液 5 ml。在 37℃ 恒溫水浴振蕩器內 30 min。

4. 用 300 目尼龍網過濾，離心沉淀 1000 r/min，5 min。再以生理鹽水洗 2~3 次。

5. 細胞固定或低溫保存備用。