網織紅細胞樣品的制備及分析

原理

網織紅細胞是一種未完全成熟紅細胞。在細胞成熟過程中，其胞質中的 RNA 含量逐漸被血紅蛋白所取代，因此，檢測紅細胞中 RNA 的含量多少，就代表了紅細胞的成熟程度。從而成為檢測網織紅細胞的重要方法。網織紅細胞計數可以判斷骨髓紅細胞系統造血情況。溶血性貧血時由于大量網織紅細胞進入血循環，可使網織紅細胞高達 0.20 或更高。急性失血后 5~10 d，網織紅細胞達高峰。2 周后恢復正常。典型再生障礙性貧血病例，網織紅細胞百分比常為 0.005。網織紅細胞數低于 5 X 109/L 且為診斷再生障礙性貧血的標準之一。網織紅細胞升高表示骨髓紅細胞增生活躍，多見于各種急慢性失血溶血和治療有效的各類增生性貧血，如缺鐵性貧血、溶血性貧血、巨幼細胞性貧血等，是貧血治療中非常高價值的監測指標。網織紅細胞減低見于各種骨髓增生能力低下的疾病，尤多見于重型再生障礙性貧血等。

材料與儀器

全血
EDTA Good 緩沖液 枸櫞酸鈉緩沖液 戊二醛緩沖液 PBS 派若寧 Y 工作液

步驟

1. 抽取全血 0.5 ml，注入盛有 0.5 ml 的 0.1 mol/L EDTA 溶液中。

2. 用微量取液器取 50 uI EDTA 抗凝血，置于另一離心管中，加入 Good 緩沖液 5.0 ml，以 1000 r/min 離心 5 min，連續洗 3 次。

3. 將沉淀細胞加入 1.0 ml 枸櫞酸鈉緩沖液，輕輕振蕩懸浮。

4. 將懸浮液緩慢注入盛有 4 ml 0.1% 戊二醛緩沖液中固定 15 min。

5. 上 FCM 之前，用 PBS 洗去固定液，加入 0.5 ml 0.01% 的派若寧 Y 工作液，染色 30 min 離心沉淀物，去染液，然后 1500 r/min 離心 5 min。

6. 用 PBS 洗 1 次，以 1500 r/min 離心 5 min，去上清液，再用 PBS 將細胞懸浮，上機檢測。